Expansion and phenotypic changes of mouse bone marrow mesenchymal cells cultured with FGF-2 and facial nerve-conditioned medium / Expansión y cambios fenotípicos de células mesenquimales de médula ósea de ratón cultivadas con FGF-2 y medio condicionado por el nervio facial

Mesenchymal cells (MCs) exhibit great regenerative potential due to their intrinsic properties and ability to restore tissue function, either directly through transdifferentiation or indirectly through paracrine effects. This study aimed to evaluate morphometric and phenotypic changes in MCs grown with facial nerve-conditioned medium in the presence or absence of fibroblast growth factor 2 (FGF-2). For quantitative phenotypic analysis, the expression of GFAP, OX-42, MAP-2, β-tubulin III, NeuN, and NF-200 was analyzed by immunocytochemistry. Cells cultured with facial nerve-conditioned medium in the presence of FGF-2 expressed GFAP, OX-42, MAP-2, β-tubulin III, NeuN, and NF-200. On average, the area and perimeter of GFAP-positive cells were higher in the group cultured with facial nerve-conditioned medium compared to the group cultured with conditioned medium and FGF-2 (p=0.0001). This study demonstrated the plasticity of MCs for neuronal and glial lineages and opens up new research perspectives in cell therapy and trans.differentiation.

Las células mesenquimales (CM) exhiben un gran potencial regenerativo debido a sus propiedades intrínsecas y la capacidad de restaurar la función del tejido, ya sea directamente, a través de la transdiferenciación, o indirectamente, a través de efectos parácrinos. Este estudio tuvo como objetivo evaluar los cambios morfométricos y fenotípicos en CM cultivadas con medio condicionado por nervio facial en presencia o ausencia de factor de crecimiento de fibroblastos 2 (FGF-2). Para el análisis fenotípico cuantitativo, se analizó la expresión de GFAP, OX-42, MAP-2, β-tubulina III, NeuN y NF-200 mediante inmunocitoquímica. Las células cultivadas con medio condicionado por el nervio facial en presencia de FGF-2 expresaban GFAP, OX-42, MAP-2, β-tubulina III, NeuN y NF-200. En promedio, el área y el perímetro de las células positivas para GFAP fueron mayores en el grupo cultivado con medio condicionado por el nervio facial en comparación con el grupo cultivado con medio acondicionado y FGF-2 (p = 0,0001). Este estudio demostró la plasticidad de CM para linajes neuronales y gliales y abre nuevas perspectivas de investigación en terapia celular y transdiferenciación.

Chenopodium ambrosioides L. extract prevents bone loss

ABSTRACT PURPOSE: To evaluate the effect of the Chenopodium ambrosioides L (mastruz) extract for preventing bone loss and bone metabolism in ovariectomized rats. METHODS: Twelve rats were subjected to bilateral ovariectomy for inducing osteoporosis. After surgery, they were divided into two groups: Ovariectomy-control group (G1, n=6), receiving 0.5 ml distilled water by gavage for 30 days, and Ovariectomy plus mastruz group (G2, n=6), receiving 0.5 ml of the hydroalcoholic extract of mastruz at 10% concentration (50mg) daily, for the same period. Then, the blood of the animals was collected for further biochemical analysis (liver function) and tibia and liver were removed for histological and histomorphometric analyses. RESULTS: The cortical bone was significantly larger in the G2 than G1, whereas G1 presented the highest amount of adipocytes in the bone marrow (p<0.05). The blood levels of aspartate aminotransferase, triglycerides and cholesterol were significantly higher, whereas globulin and lactate dehydrogenase were smaller in G2 than G1. CONCLUSION: The hydroalcoholic extract of mastruz has effects on bone metabolism by changing blood proteins and enzymes and preventing both bone loss and the substitution of bone marrow cells by.

Biodistribution of technetium-99m pertechnetate after Roux-en-Y gastric bypass (Capella technique) in rats / Biodistribuição de tecnécio-99m pertecnetato após desvio gástrico em Y de Roux (técnica de Capella) em ratos

PURPOSE: The biodistribution of sodium pertechnetate, the most used radiopharmaceutical in nuclear medicine, has not been studied in details after bariatric surgery. The objective was to investigate the effect of Roux-en-Y gastric bypass (RYGB) on biodistribution of sodium pertechnetate (Na99mTc-) in organs and tissues of rats. METHODS: Twelve rats were randomly divided into two groups of 6 animals each. The RYGB group rats were submitted to the Roux-en-Y gastric bypass and the control group rats were not operated. After 15 days, all rats were injected with 0.1mL of Na99mTc- via orbital plexus with average radioactivity of 0.66 MBq. After 30 minutes, liver, stomach, thyroid, heart, lung, kidney and femur samples were harvested, weighed and percentage of radioactivity per gram ( percentATI/g) of each organ was determined by gama counter Wizard Perkin-Elmer. We applied the Student t test for statistical analysis, considering p<0.05 as significant. RESULTS: Significant reduction in mean percentATI/g was observed in the liver, stomach and femur in the RYGB group animals, compared with the control group rats (p<0.05). In other organs no significant difference in percentATI/g was observed between the two groups. CONCLUSION: This work contributes to the knowledge that the bariatric surgery RYGB modifies the pattern of biodistribution of Na99mTc-.

OBJETIVO: Avaliar o efeito da cirurgia de desvio gástrico em Y de Roux (BGYR) na biodistribuição do pertecnetato de sódio (Na99mTc) em órgãos e tecidos de ratos. MÉTODOS: Doze ratos Wistar foram aleatoriamente distribuidos em dois grupos de seis animais cada. O grupo BGYR foi submetido a técnica cirúrgica do desvio gástrico em Y de Roux e o grupo controle não foi operado. No 15º dia de pós-operatório foi administrado 0,1 ml IV de Na99mTc aos animais dos dois grupos, com atividade radioativa média de 0,66MBq. Após 30 minutos os ratos foram mortos e retirados fragmentos de fígado, estômago, tireóide, coração, pulmão, rim e fêmur. As amostras foram lavadas com solução salina 0,9 por cento pesadas e submetidas ao Contador Gama 1470, WizardTM Perkin-Elmer para se determinar o percentual de atividade radiotiva por grama ( por centoATI/g) de cada órgão. Empregou-se o teste t de Student para análise estatística, considerando p<0,05 como significante. RESULTADOS: Redução significante na média de por centoATI/g foi observada no fígado, estômago e fêmur nos animais submetidos a cirurgia de BGYR comparado com o grupo controle (p<0,05). Nos demais órgãos não houve diferença significante no por centoATI/g entre os dois grupos. CONCLUSÃO: A cirurgia BGYR em ratos modificou a biodistribuição do Na99mTc em alguns órgãos, podendo ter implicações clínicas na interpretação de exames cintilográficos.

Efeitos da aplicação tópica do mel de Melipona subnitida em feridas infectadas de ratos / Effects of topical application of the honey of Melipona subnitida in infected wounds of rats

OBJETIVO: Avaliar efeitos do uso tópico do mel da abelha silvestre Melipona subnitida na evolução de feridas infectadas de pele. MÉTODO: Ratos Wistar foram distribuídos aleatoriamente em grupos de 6, anestesiados com tiopental sódico 20mg/Kg IP e cetamina 30mg/Kg IM e submetidos a exérese de segmento de 1 cm² de pele total do dorso. Os ratos do grupo C (não infectado) foram tratados com solução salina sobre a ferida diariamente e no grupo MEL (não infectado) as feridas foram tratadas com mel uma vez por dia. Nos grupos C/I e MEL/I as feridas foram inoculadas com solução polimicrobiana. Culturas foram feitas 24 horas após. Caracterizada a infecção, as feridas foram tratadas com solução salina e mel, respectivamente. No terceiro dia de tratamento foi feita nova cultura. Após epitelização foi contado o tempo de cicatrização e as feridas foram biopsiadas para histopatologia e dosagem de TNF-α, IL-1β e IL-6 no tecido. RESULTADOS: O tempo médio de cicatrização do grupo MEL/I foi menor que nos demais grupos (P<0,05). Verificou-se que a densidade de colágeno, leucócitos, fibroblastos e dosagem de citocinas (especialmente TNF) foi maior no grupo infectado e tratado com mel que nos demais grupos. Houve significante redução de bactérias Gram-negativas e positivas nas feridas após o tratamento com mel. CONCLUSÃO: O uso tópico de mel de Melipona subnitida em feridas infectadas da pele de ratos estimulou a resposta imunológica, reduziu a infecção e o tempo de cicatrização.

BACKGROUND: The current study investigated the antimicrobial, immunological and healing effects of Melipona subnitida honey on infected wounds of rat skin. METHOD: Wistar rats were anesthetized with sodium thiopental 20mg/Kg IP and ketamine 30 mg/kg IM. We evaluated the effects of honey using rats by generating 1 cm² full-thickness skin wounds on the dorsum. The wounds of Group C rats (not infected) were treated daily with topic saline solution (0.9 percent) and in the Group HONEY (not infected) the wounds were treated with topic honey once a day. In the Groups C/I (infected) and HONEY/I (infected) the wounds were inoculated with polymicrobial solution, and tissue bacterial culture was performed 24 hours later. These wounds were treated with topic saline solution and honey, respectively. In the third day of treatment it was made a new bacterial culture. After epithelialization, wound tissue biopsies were used for cytokines dosage and histology. RESULTS: The HONEY/I wounds showed more rapid healing and re-epithelialization than in the other groups, and the difference was significant (p<0.05). It was observed that the density of collagen, fibroblasts, macrophages and the expression of TNF-á, IL1-â and Il-6 were higher on the HONEY/I wounds then in the other groups. After the treatment with honey, the amount of Gram-positive and Gram-negative bacteria in the infected wounds decreased significantly. CONCLUSION: The results may encourage the use of honey in skin infected wounds because it stimulated cytokine production, reduced the healing time and had antibacterial activity.

Simvastatin improves the healing of infected skin wounds of rats

PURPOSE: This study explores the potential of the simvastatin to ameliorate inflammation and infection in open infected skin wounds of rats. METHODS: Fourteen Wistar rats weighing 285±12g were used. The study was done in a group whose open infected skin wounds were treated with topical application of sinvastatina microemulsion (SIM, n=7) and a second group with wounds treated with saline 0.9 percent (SAL, n=7). A bacteriological exam of the wounds fluid for gram positive and gram negative bacteria, the tecidual expression of TNFá and IL-1â by imunohistochemical technique, and histological analysis by HE stain were performed. RESULTS: The expression of TNFa could be clearly demonstrated in lower degree in skin wounds treated with simvastatin (668.6 ± 74.7 ìm²) than in saline (2120.0 ± 327.1 ìm²). In comparison, wound tissue from SIM group displayed leukocyte infiltration significantly lower than that observed in SAL group (p<0.05). Culture results of the samples taken from wound fluid on fourth post treatment day revealed wound infection in only one rat of group simvastatin (SIM), where Proteus mirabilis, Escherchia coli and Enterobacter sp were isolated. In the rats whose wounds were treated with saline (SAL), polymicrobial infection with more than 100,000 CFU/g was detected in all the wounds. CONCLUSION: In addition to its antiinflammatory properties, the protective effects of simvastatin in infected open skin wounds is able to reduce infection and probably has antibacterial action. The potential to treat these wounds with statins to ameliorate inflammation and infection is promising.

OBJETIVO: O presente estudo avaliou o potencial da sinvastatina para atenuar a inflamação e a infecção em feridas abertas infectadas de pele de ratos. MÉTODOS: Foram utilizados 14 ratos Wistar pesando 285±12g. O estudo foi realizado com um grupo de animais cujas feridas abertas infectadas foram tratadas com aplicação tópica de sinvastatina microemulsão (SIM, n=7) e um segundo grupo com feridas tratadas com solução salina 0,9 por cento (SAL n=7). Foi realizado exame bacteriológico do fluido das feridas para detecção de bactérias gram positivas e negativas, a expressão tecidual de TNFá e IL-1â por imunohistoquímica e análise histológica pela coloração H-E. RESULTADOS: A expressão do TNFa pode ser claramente demonstrada em menor grau nas feridas de pele tratadas com sinvastatina (668.6 ± 74.7 ìm²) do que no grupo salina (2120.0 ± 327.1 ìm²). Em comparação, os tecidos das feridas do grupo SIM mostrou infiltração leucocitária significantemente menor do que a observada no grupo SAL (p<0,05). O resultado das culturas realizadas no fluido das feridas no 4° dia de tratamento revelou infecção em apenas um rato do grupo sinvastatina (SIM), onde Proteus mirabilis, Escherchia coli e Enterobacter sp foram isolados. Nos ratos cujas feridas foram tratadas com solução salina (SAL), infecção polimicrobiana com mais de 100,000 UFC/g foi detectada em todas as feridas. CONCLUSÃO: Além de suas propriedades antiinflamatórias, o efeito protetor da sinvastatina em feridas abertas e infectadas de pele é capaz de reduzir a infecção e provavelmente tem ação antibacteriana. O potencial da droga para atenuar inflamação e infecção de feridas é promissor.

Influence of laparoscopy and laparotomy on gasometry, leukocytes and cytokines in a rat abdominal sepsis model

OBJETIVO: A cirurgia laparoscópica está associada com trauma reduzido e baixa resposta na fase aguda do trauma, quando comparada com a cirurgia aberta. As citocinas e o balanço ácido-base são fatores importantes da resposta biológica ao trauma cirúrgico-anestésico. O objetivo deste estudo foi determinar se o pneumoperitôneo com CO2 altera a expressão das citocinas, a gasometria e a contagem diferencial de leucócitos em ratos com sepse abdominal. MÉTODOS: Ratos Wistar foram aleatoriamente distribuídos em 5 grupos: controle (somente anestesia), laparotomia, pneumoperitôneo com CO2, ligadura e punção do ceco por laparotomia, ligadura e punção do ceco por laparoscopia. Após 30 minutos dos procedimentos, sangue arterial foi colhido para leucometria diferencial em hemocitômetro. TNFa, IL-1b e IL-6 foram dosadas no líquido intraperitoneal (por ELISA). Os parâmetros gasosos foram medidos no sangue arterial e nos exsudatos intraperitoneal e subperitoneal. RESULTADOS: Os valores de TNFa, IL-1b e IL-6 foram significantemente menores nos ratos submetidos ao pneumoperitôneo do que em todos os outros grupos (p<0.05). Expressão de TNFa, IL-1b e IL-6 foi menor no grupo sepse induzida por laparoscopia do que por laparotomia (p<0.05). Os ratos submetidos a ligadura e punção do ceco via laparoscópica desenvolveram acidose hipercárbica no sangue arterial e exsudato subperitoneal, mais intensa do que no grupo sepse laparotômica. Leucopenia e linfopenia foram mais acentuadas no grupo sepse laparoscópica (p<0.01). Entretanto, os animais submetidos a sepse laparotômica desenvolveram significante aumento de neutrófilos e eosinófilos quando comparados com os controles (p<0.05). CONCLUSÕES: Este estudo demonstrou que o pneumoperitôneo com CO2 contribuiu para reduzir a resposta inflamatória em ratos submetidos a modelo de sepse abdominal, no que diz respeito à expressão de citocinas intraperitoneais e leucometria diferencial. O pneumoperitôneo também contribuiu para instalação de acidose hipercárbica nos ratos sépticos.

Effects of simvastatin in abdominal sepsis in rats

PURPOSE: Statins are widely recognized as hypolipemic drugs, but some studies have observed anti-inflammatory and immunomodulatory effects, known as pleiotropic. The aims of this work was to study possible anti-inflammatory effects of simvastatin in abdominal sepsis. Serum pro-inflammatory cytokines and leukocytes count were determined in an experimental model of abdominal sepsis, using cecal ligation and puncture (CLP) in rats. METHODS: Twenty eigth Wistar rats weighing 285±12g were randomly divided in: CLP/Sinvastatin rats (n=7), treated with 10 mg/Kg of oral simvastatin 18 and 2 hs berofe CLP; CLP/Saline group rats (n=7), treated with oral saline; group Sham/Simvastatin (n=7), treated with simvastatin, and group Sham/Saline (n=7), treated with saline. Serum TNF-alpha, IL-1beta and IL-6 by ELISA and total leukocytes, neutrophils, lymphocytes, and eosinophils were determined 24 hs after CLP. ANOVA and Tukey test were used considering significant p<0.05. RESULTS: It was demonstrated that serum TNF-alpha, IL-1beta and IL-6 were respectively 364,8±42pg/mL; 46,3±18pg/mL and 28,4±13pg/mL in CLP/Sinvastatin rats, significantly lower (p<0.05) than in group CLP/Saline (778,5±86pg/ml; 176,9±46pg/ml; 133,6±21 pg/ml, respectively). The same results were observed in total leukocytes and neutrophils counts. CONCLUSION: These results clearly demonstrate that simvastatin is an effective agent that reduces cytokines levels and leukocyte count in sepsis, independently of its well-known lipid-lowering effects. Thus, HMG-CoA reductase inhibitors like simvastatin have important anti-inflammatory effects in abdominal sepsis in rats.

OBJETIVO: As estatinas são agentes reconhecidamente hipolipemiantes. Vários estudos têm revelado que eles têm ações pleiotrópicas, como antiinflamatória e imunomoduladora. Tentando-se entender o papel antiinflamatório da sinvastatina na sepse, foram analisados os níveis de citocinas pró-inflamatórias e contagem de leucócitos em modelo de sepse abdominal por ligadura e punção do ceco (LPC) em ratos. MÉTODOS: Foram utilizados 28 ratos Wistar pesando 285±12g, assim divididos: grupo sepse (n=14), submetidos a LPC e grupo sham (n=14), submetidos a laparotomia e manipulação suave do ceco. No grupo LPC/sinvastatina (n=7) os ratos receberam 10mg/kg de sinvastatina via oral 18 e 2 horas antes da LPC e no grupo LPC/salina (n=7) os ratos receberam injeção oral de solução salina 0,9 por cento. Os animais dos grupos sham/sinvastatina (n=7) e sham/salina (n=7) receberam o mesmo tratamento. Dosagem de TNF-alfa, IL-1beta e IL-6 por ELISA e contagem de leucócitos totais, neutrófilos, linfócitos e eosinófilos foram realizadas em todos os animais. Análise estatística foi feita pelo ANOVA e teste de Tukey, com significância p<0,05. RESULTADOS: Ficou demonstrado que as dosagens de TNF-alfa, IL-1beta e IL-6 atingiram valores de 364,8±42pg/ml; 46,3±18pg/ml e 28,4±13pg/ml no grupo submetido à sepse e tratados com sinvastatina, significantemente mais baixos do que no grupo sepse não tratados (778,5±86pg/ml; 176,9±46pg/ml; 133,6±21 pg/ml, respectivamente). O mesmo ocorreu na contagem de leucócitos totais e neutrófilos. CONCLUSÃO: A sinvastatina mostrou ação anti-inflamatória em ratos Wistar, diminuiu níveis de citocinas e leucócitos, sugerindo uso potencial na prevenção ou atenuação dos efeitos da sepse abdominal.